局灶性脑缺血及脑缺血再灌注动物模型的制作

发布于:2021-10-20 20:17:21

局灶性脑缺血及脑缺血再灌注动物模型的制作 作者:张秋玲;孙远标;李金国;陈小娱;白波 作者机构:泰山医学院神经生物学实验室,山东省,泰安市,271000;泰安市中医院 脑病中心,山东省,泰安市,271000;泰山医学院神经生物学实验室,山东省,泰安 市,271000;泰山医学院神经生物学实验室,山东省,泰安市,271000;泰山医学院神 经生物学实验室,山东省,泰安市,271000 来源:中国组织工程研究 ISSN:2095-4344 年:2006 卷:010 期:038 页码:106-109 页数:4 中图分类:R74 正文语种:chi 关键词:脑缺血;再灌注损伤;凋亡细胞;疾病模型,动物 摘要:目的:介绍一种简便易行的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备方法.方 法:实验于 2003-03/2005-03 在泰山医学院神经生物学实验室完成.选择健康成 年清洁级 SD 大鼠 48 只,随机数字表法分为假手术组 6 只,脑缺血组 24 只,脑缺 血再灌注组 18 只.选择韩国产的 3 号圆柱形尼龙钓鱼线,直径 0.286 4 mm,剪成 长 30 mm 若干段,将其一端粘少许用乙醇稀释合适浓度的指甲油,可形成一薄层 保护膜,使插线前端光滑无锐缘,且插线前端无明显膨大,然后垂直倒放,自然凉干, 于距处理端 18,20 mm 处做黑色标记备用.自制插线从颈外动脉经颈内动脉插 入,栓塞大脑中动脉,形成脑缺血状态,分别缺血 30 min,24 h,2,3 d,每个时相点 6 只.精确控制栓塞时间 30 min,拔出插线,形成脑缺血再灌注状态,分别再灌注 24h,2,3 d,每个时相点 6 只.观察动物模型的成功率,大鼠脑组织溴化 2,3,5-氯化 三苯基四氮唑红染色结果,光镜下脑组织尼氏小体的显示结果,脑细胞电镜观察结 果,凋亡细胞观察结果.结果:①假手术组动物模型成功率为 100%,脑缺血组动物 模型成功率为 91.7%,脑缺血再灌注组动物模型成功率为 94.4%.②溴化 2,3,5氯化三苯基四氮唑红染色结果:脑缺血 30 min 肉眼几乎分辨不出梗死灶;脑缺血 24 h 梗死灶主要累及大脑皮质额叶颞侧及其纹状体颞侧靠*大脑皮质下的边缘 部分;脑缺血 2 d 梗死灶几乎累及缺血侧大脑半球额顶叶的全部及其纹状体的大 部分;脑缺血 3 d 梗死灶累及缺血侧的全部脑组织,甚至累及部分对侧脑组织;脑 缺血再灌注显示梗死灶主要累及缺血侧大脑皮质颞侧及纹状体的颞侧部分.③尼 氏染色结果显示脑缺血 30 min,脑组织结构无明显变化;脑缺血 24 h,脑损伤侧梗 死区内广泛细胞坏死,部分细胞自溶;脑缺血 30 min 再灌注 24 h,脑损伤侧呈现 点状坏死灶;脑缺血 2 d,脑损伤侧呈现较多片状坏死灶;脑缺血 30 min 再灌注 2 d 脑细胞边界呈现毛刺样;脑缺血 3 d,损伤侧脑组织大片状坏死;脑缺血 30 min 再灌注 3 d,脑损害趋向稳定.④电镜结果显示:脑缺血 30 min,神经细胞结构、层 次破坏不明显;脑缺血 24 h,细胞内出现许多高密度中毒颗粒.脑缺血 30 min 再 灌注 24 h,神经细胞胞质内出现少量小的空泡及高密度中毒颗粒;脑缺血 2 d,很 少见到能分辨的细胞结构;脑缺血 30 min 再灌注 2 d,神经细胞膜性结构继续破 坏,结构尚可辨认;脑缺血 3 d,未见形态可辨的神经细胞;脑缺血 30 min 再灌注 3 d,能够分辨细胞残存的部分膜性结构.⑤脑缺血组、脑缺血再灌注组凋亡细胞高 于假手术组,差异有显著性意义[分别为(75.0±2.3),(47.0±3.7),(8.0±1.2) 个,F=12.3,P=0.019<0.05].结论:该方法简便快捷(手术时间不足 15 min),结果 可靠,稳定性好,是较理想的一种大鼠局灶性脑缺血再灌注动物模型.

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